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高效液相色譜中常見(jiàn)的峰形畸變

更新時(shí)間:2023-11-22 瀏覽次數(shù):1053

在使用液相色譜儀時(shí),經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)峰形畸變的情況。接下來(lái)就讓我們一起來(lái)看看,如何才能避免峰形失真。

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當(dāng)檢測(cè)器因樣品過(guò)載時(shí)會(huì)出現(xiàn)平ding峰響應(yīng)。在這種情況下,檢測(cè)器的靈敏度要高得多,并且會(huì)飽和以產(chǎn)生寬闊的平ding峰。一種選擇是衰減信號(hào)響應(yīng)(不是實(shí)際的解決方案),因?yàn)槠渌宓臋z測(cè)也會(huì)受到影響。更可行的選擇是降低樣品濃度或進(jìn)樣量。

峰拖尾是由于表面硅烷醇基團(tuán)電離為 - Si-O - 提供陽(yáng)離子交換位點(diǎn)而引起的常見(jiàn)失真。解決方案在于使用高純度級(jí)硅膠載體以及推薦的 pH 值范圍 2-8。

緩沖液控制添加劑的使用也限制了硅膠表面上硅烷醇基團(tuán)的電離。添加劑如(TFA)是一種離子配對(duì)劑,有助于抑制電離。濃度范圍為 10-25 mM 的緩沖液添加劑足以滿足大多數(shù)應(yīng)用的需求。

通過(guò)過(guò)濾流動(dòng)相溶劑、使用入口過(guò)濾器和更換泵密封件,在它們開(kāi)始磨損和釋放垃圾顆粒之前,可以防止篩板堵塞或空隙形成。

低純度二氧化硅通常含有促進(jìn)硅烷醇基團(tuán)電離的金屬雜質(zhì)。由于與固定相中的金屬離子螯合,使用高純度硅膠固定相有助于拖尾。

與峰拖尾相比,峰前移不太常見(jiàn)

通常由于色譜柱內(nèi)的溝道而導(dǎo)致峰前移。最好更換色譜柱或以其他方式在推薦的 pH 范圍內(nèi)操作。

色譜柱過(guò)載也會(huì)導(dǎo)致峰前移。使用稀釋樣品或減少進(jìn)樣量。

流動(dòng)相與樣品的不相容性通常會(huì)導(dǎo)致峰前移。將樣品溶解在流動(dòng)相或其他兼容溶劑中

肩峰和分裂峰通常是由于兩種未分離的化合物的存在造成的。

減少樣品量或使用稀釋溶液通??梢越鉀Q分裂問(wèn)題

峰的分裂也是由玻璃料堵塞引起的。使用 20 – 30 ml 流動(dòng)相的反向流動(dòng)通常可以解決峰分裂問(wèn)題。

更換堵塞的篩板或保護(hù)柱

當(dāng)由于存在兩種接近洗脫的化合物而導(dǎo)致分裂時(shí),請(qǐng)?jiān)谶M(jìn)樣前進(jìn)行樣品凈化。



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